Agus staidéir ghéiniteacha á ndéanamh againn, is minic a bhíonn samplaí RNA neamhleor againn, mar shampla, chun staidéar a dhéanamh ar shiadaí béil bídeacha anatamaíocha, fiú samplaí aonchealla, agus samplaí de shócháin géine ar leith a thrascríobhtar ag leibhéil an-íseal i gcealla daonna.Ar ndóigh, don tástáil COVID-19, mura bhfuil na táithíní san áit cheart nó mura mbíonn go leor uaireanta le linn na samplála, beidh méid an tsampla an-íseal, agus is é sin an fáth ar tháinig an Coimisiún um Shláinte agus Pleanáil Teaghlaigh amach dhá lá ó shin agus éirigh leis an tástáil, agus más rud é nach ndearna an samplóir aigéad núicléach sé shampla, is féidir leat é a thuairisciú.
Tá íogaireacht an imoibrí tábhachtach toisc go bhfuil an fhadhb seo nó an fhadhb sin againn, mar sin cad is féidir linn a dhéanamh chun íogaireacht RT-PCR a fheabhsú?
Sula ndéanaimid plé ar réitigh fhéideartha, déanaimis dhá aimhréití móra a lua leis an gcás atá luaite againn.
Ar an gcéad dul síos, táimid buartha faoi chaillteanas RNA nuair nach bhfuil ach cúpla daonra cille inár sampla.Má úsáidtear modhanna scaradh agus glantacháin traidisiúnta, mar shampla modh colún nó modh deascadh aigéad núicléach, tá an-fhéidearthacht ann go gcaillfear an cúpla sampla.Is é réiteach amháin ná móilín iompróra a chur leis, mar shampla tRNA, ach fiú amháin ansin, níl aon ráthaíocht ann go bhfuil ár dturgnamh aisghabhála ceart go leor.
Mar sin, cad é bealach níos fearr?Rogha maith le haghaidh cealla saothraithe nó samplaí microanatomical ná lysis díreach a úsáid.
Is é an smaoineamh ná na cealla a roinnt ar feadh 5 nóiméad, an RNA a scaoileadh isteach sa réiteach, ansin an t-imoibriú a stopadh ar feadh 2 nóiméad, ansin cuir an lysate go díreach leis an imoibriú trascríobh droim ar ais ionas nach gcailltear aon RNA, agus ar deireadh cuir an cDNA mar thoradh air go díreach. isteach san imoibriú fíor-ama.
Ach cad más rud é, mar gheall ar phointe tosaigh teoranta nó méid beag de léiriú géine sprice, gur féidir linn an RNA go léir a athchúrsáil agus fós gan dóthain teimpléid a sholáthar chun comhartha maith fíor-ama a fháil?
Sa chás seo, is féidir an chéim réamh-aimplithe a bheith an-úsáideach.
Seo a leanas scéim chun íogaireacht a mhéadú tar éis trascríobh droim ar ais.Sula dtosaímid, caithfimid fiafraí iartheachtacha cé na spriocanna a bhfuil suim againn iontu, chun primers sonracha a dhearadh do na spriocanna seo le haghaidh réamh-aimplithe.
Is féidir é seo a bhaint amach trí primer measctha a chruthú le suas le 100 péire primers agus timthriall imoibrithe 10 go 14 huaire.Mar sin, tá gá le Máistir-Mheascán atá deartha go sonrach don riachtanas seo chun an cDNA a fhaightear a réamh-aimpliú.
Is é an chúis atá le líon na dtimthriallta idir 10 agus 14 a shocrú ná go gcinntíonn an líon teoranta timthriallta seo randamacht idir na spriocanna éagsúla, rud atá ríthábhachtach do thaighdeoirí a dteastaíonn faisnéis mhóilíneach chainníochtúil orthu.
Tar éis réamh-aimpliú, is féidir linn méid mór cDNA a fháil, ionas go mbeidh an íogaireacht braite ag an gcúl-deireadh feabhsaithe go mór, agus is féidir linn an sampla a chaolú fiú agus imoibrithe PCR iolracha fíor-ama a dhéanamh chun deireadh a chur le hearráidí randamacha féideartha.
Am poist: Apr-11-2023